尊龙凯时人生就博推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理开发的高效检测试剂盒,具备以下多项显著特点:
产品特点
1. 即开即用:用户只需提供样品DNA模板,操作简便。
2. 高灵敏度:经过优化的引物等组分确保了卓越的灵敏度。
3. 阳性对照:提供可靠的阳性对照,帮助用户方便地区分假阴性样品。
4. 高特异性:引物设计基于高保守的中间普雷沃菌DNA序列,能够有效避免与其他生物样本DNA产生交叉反应。
5. 多用途检测:不仅可以用于定性检测,还兼具定量检测功能,定量时线性范围可达到至少5个数量级。
6. 经济实用:本产品可进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 科研专用:本产品仅限于科研使用。
使用方法
1. DNA提取(样本制备区)
使用用户自选的核酸提取方法从样本中提取纯化DNA,本试剂盒与市面上大多数核酸提取试剂盒兼容。
2. 稀释标准曲线样品(样本制备区)
为避免污染,应在独立区域进行下列稀释操作:
1. 标记六个离心管,分别为7、6、5、4、3、2。
2. 每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照,震荡1分钟,得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品并放冰待用。
4. 按照相同操作逐步稀释,得到6个不同稀释度的标准曲线样品。
如不需标准曲线,只需将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。
3. 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样品的数量,准备N+2个qPCR管,分别加入所需成分。详细说明可向尊龙凯时人生就博索取。
4. 添加模板(模板添加区)
向各PCR管中加入2μL的模板,添加顺序为阴性对照(DEPC-H2O)、待测样品模板、阳性对照,并离心30秒后立即进行扩增反应。
5. 扩增反应(扩增及产物分析区)
将PCR管放置于PCR扩增仪器中,依据设备说明书执行扩增程序。
6. 结果分析
如果制作了标准曲线,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴绘制标准曲线,再通过待测样品的Ct值推算样品DNA浓度的log值。
若未制作标准曲线,可根据以下标准判定结果:
阳性对照结果:Ct值<30,呈现明显的指数增长,相应曲线为典型的S型;
阴性对照结果:Ct值为38或无Ct值,无明显的指数增长;
样本检测结果:Ct值<35,表明样本中存在目标DNA,结果为阳性;Ct值在35-38范围内需复检。
复检结果依旧在35-38范围且有增长,则判定为阳性,否则为阴性。
运输及保存
产品需低温运输,保存温度为-20℃,有效期为一年。阳性对照应用于单独存放,避免污染其他试剂。
选用尊龙凯时人生就博的检测试剂盒,让您的实验更精准、高效,为生物医疗研究贡献力量。