一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19
生长特性：悬浮生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：首次推荐1:2的传代比例
备注：如对比培养效果不佳，建议直接购买尊龙凯时人生就博的完全培养基。

二、收到细胞后的处理

细胞到达后，应尽快培养至良好状态，随后将其全部灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。处理步骤：收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后将细胞瓶放入超净工作台内，进行严格的无菌操作。接着，将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以保证细胞状态稳定。在此期间，通过显微镜观察细胞生长情况，并对不同倍数进行拍照保存（建议拍摄40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为重要售后依据，若未提供照片则默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，并置于37℃、5% CO2的孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则进行传代培养，具体步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
添加约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速将其带回操作台，轻敲培养瓶后加5ml以上完全培养基以终止消化。
轻轻吹打使细胞完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），然后补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
添加约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，消化后加入5ml完全培养液终止反应，轻轻吹打使细胞脱落，并转移至15ml离心管，再离心5分钟。
弃去上清，沉淀的细胞加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如后期需要转入液氮罐，则需在-80℃冰箱存放24小时以上再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护装备），快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外部。
将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000rpm离心5分钟。
弃去上清，沉淀细胞后用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞因附着不牢而在运输过程中容易脱落，属于正常现象。如脱离的细胞较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管，进行离心以收集沉淀，之后使用胰酶进行处理，注意控制操作的温和性。随即进行重悬，并按1:2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

在细胞出现问题时，以下情况可重发：

细胞在运输过程中发生损坏或污染，需在48小时内反馈真实实验结果以核实后进行重发。
细胞存活状态不佳等问题，需提供清晰的细胞状态照片，并在规定时间内反馈。

而因客户个人操作失误或不当使用导致的问题，将不予重发。请务必遵循该说明书中的步骤，以确保使用尊龙凯时人生就博的产品获得最佳效果。