## SV40转染人成骨细胞HFOB119培养指南

尊龙凯时人生就博为您提供SV40转染人成骨细胞HFOB119的详细培养指导，确保您在实验过程中获得最佳的细胞生长效果。

### 一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS

传代方法：首次建议1:2传代

备注：使用无菌离心管收集培养基，适用于对比培养。如对比效果不佳，建议直接选购我们的完全培养基。

### 二、细胞收到后的处理

为确保细胞状态良好，收到细胞后请立即灌满完全培养液并密封瓶口。针对运输后的处理，请用75%酒精喷洒细胞瓶消毒，随后放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于33.5℃、5% CO2的培养箱内静置3-4小时，使细胞稳定状态后再进行处理。

显微镜观察细胞生长状态，并进行不同倍数的拍照保存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片为售后依据，不提供照片则默认为收到状态良好。

在进行传代后，建议使用一瓶原瓶培养基，另一瓶使用自制培养基进行对比培养，换液后需松开瓶盖。

### 三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：

如细胞汇合度未超过80%，将完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基放入33.5℃、5% CO2孵箱培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于33.5℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若大部分变圆脱落，及时取回操作台，轻敲培养瓶后添加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入33.5℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：

1. 当细胞生长覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打后转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管，快速置入33.5℃水浴解冻，直至管内无结晶，用75%酒精擦拭外壁；
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于33.5℃、5% CO2细胞培养箱中；
4. 次日更换为新鲜完全培养基，继续培养。

### 四、注意事项

在运输过程中，细胞可能会脱落，如脱离较多，请将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟后进行处理。需轻吹以使细胞重新悬浮并消化，之后跟随传代步骤继续培养。

### 五、售后条款

对于细胞出现的任何问题，我们提供责任判定及补发服务。请注意，客户需在收到后48小时内反馈实验结果，提供详细细胞状态照片以便核实。细胞状态不良但未提供前三天的照片，将不予重发。详细条款可咨询我们的客服以获取更多信息。

如您在细胞培养过程中需要更多支持，欢迎随时联系尊龙凯时人生就博，我们将竭诚为您服务。