尊龙凯时人生就博提供的婴儿利什曼虫探针法荧光定量PCR试剂盒（CAT#: 15-18620）能够高效检测婴儿利什曼虫，该虫种可引发动物源性内脏利什曼病（黑热病）。研究显示，婴儿利什曼虫在感染人类或犬只时常表现为无症状，而无症状的犬只在疾病传播中扮演了重要角色。

产品特点

本试剂盒具备多项优势：

• 即开即用，用户仅需提供DNA模板。
• 配备阳性对照，便于有效鉴别假阴性样品。
• 反应速度快，灵敏度高。
• 本试剂盒可用于50次20μL体系的探针法荧光定量PCR，仅限科研用途。

规格及成分

本试剂盒的成分包括：

• 成分编号：2×Probe qPCR Mix，规格：600μL
• 成分编号：DEPC-H2O，规格：1 mL
• 成分编号：婴儿利什曼虫qPCR引物-探针混合液，规格：90μL
• 成分编号：婴儿利什曼虫qPCR阳性对照（1×10E8拷贝/μL），规格：50μL
• 使用手册，库存：1份

运输与保存

本产品需低温运输，保存温度为-20℃，有效期为一年。阳性对照应独立存放，以避免污染其他试剂。用户需自备样品DNA和超纯水。

使用方法

一、DNA提取(样本制备区)

使用适合的方法提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市面大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品(样本制备区)

为确保样品不被污染，以下操作需在独立区域内进行：

1. 标记六个离心管，分别编号6至1。
2. 每管加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL阳性对照，混匀后得1×10E7拷贝/μL标准曲线样品，放冰待用。
4. 依次换枪头，在各个管中逐级稀释，直至获得6个稀释样品。

如无需标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制(试剂准备区)

若有N个待检测样品，准备N+2个qPCR管，其中包括1个阴性对照和6个阳性对照，按照以下成分添加：

成分	N个待检样品管	qPCR阴性对照	qPCR阳性对照
2×Probe qPCR Mix	各10μL	10μL	10μL
婴儿利什曼虫qPCR引物-探针混合液	各15μL	15μL	15μL
DEPC-H2O	65μL	65μL	65μL

四、添加模板(模板添加区)

向每个qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为：阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应(扩增及产物分析区)

将PCR管置于PCR扩增仪器，按以下程序进行扩增：

• 预变性：95℃，3分钟
• qPCR反应（40个循环）：
  • 95℃，15秒
  • 58℃，20秒
  • 72℃，20秒（采集FAM通道的荧光信号）

探针的荧光基团与猝灭基团信息如下：

• 荧光基团：FAM
• 猝灭基团：MGB

六、结果分析

结果可按以下标准解读：

• 若制作标准曲线，依据阳性对照浓度的log值与Ct值绘制曲线，推算样品质。
• 未制作标准曲线时，若阳性对照Ct值<30且呈现典型S型曲线，则为阳性；阴性对照Ct值>38或无Ct值则为阴性；待测样品若Ct值在35-38范围，需复检。

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