颞叶癫痫（TLE）是癫痫中最为常见的类型之一，患者常经历频繁发作，对其本人及家庭造成了显著的生理与心理压力。尽管现有的抗癫痫药物（ASMs）在控制发作方面有一定效果，但它们无法遏制病情的进展，且可能引发药物耐受性。最近，发表在《EMBOMolecularMedicine》上的一项研究论文《基于一氧化氮供体的颞叶癫痫新型抗癫痫病理发展策略》，为颞叶癫痫提供了一种创新的治疗思路——运用一氧化氮（NO）供体来防治此类癫痫。

研究背景显示，在颞叶癫痫患者中，约70%的人最终发展为药物耐受性癫痫（DRE），这意味着他们对临床常用的抗癫痫药物无反应。这些患者通常需接受手术切除治疗，但手术的有效性及风险问题使得寻找新疗法显得尤为紧迫。

研究团队发现，TLE患者及小鼠致痫海马区域的nNOS-NO水平显著降低。MRI结果表明，患者存在左侧海马硬化，而脑电图监测显示频繁的癫痫放电，立体脑电图则确认海马是发作的焦点。RNA测序分析进一步揭示，药物难治性癫痫患者的nNOS基因表达明显减弱，RT-qPCR及Western blot实验的验证结果也支持这一发现。此外，免疫荧光染色显示，nNOS阳性中间神经元的缺失是导致其表达下降的主要原因。

为了探讨海马中nNOS缺乏是否在癫痫的病理过程中起到关键作用，研究者创建了一种特殊的小鼠模型，通过选择性敲除海马齿状回内的神经型一氧化氮合酶（nNOS），模拟颞叶癫痫。实验表明，与野生型小鼠相比，nNOS敲除小鼠在不同剂量的匹鲁卡品诱导下，癫痫发作评分显著增加，显示出更强的癫痫敏感性。此外，脑电图记录表明，nNOS缺失小鼠在海马齿状回区域出现了自发的癫痫样尖峰放电，提示该区域可能是癫痫活动发生的起点。

进一步的研究中，研究人员专门选择性地从海马门区内的神经元中敲除了nNOS，发现其足以引发癫痫。通过CRISPR/Cas9技术构建的Nos1条件性敲除小鼠模型，以及AAV病毒介导的Cre表达进一步提高了GABAergic中间神经元中nNOS的删除特异性。结果显示，仅在海马门区中敲除nNOS就足以导致癫痫发作，而不影响其他类型的神经元。这种敲除还导致了DGCs的异常兴奋性输入回路及过度兴奋发生。

为了验证nNOS缺失是否导致海马DGCs的异常传入输入，研究者使用狂犬病毒追踪系统证实了nNOS缺失小鼠DGCs与其他神经元之间的异常连接关系，从而引起癫痫样活动。这一发现进一步强调了nNOS在维持正常神经网络功能中的重要性。

Nos1−/−小鼠对匹鲁卡品诱导的状态癫痫（SE）显著敏感，可能源于海马DGCs中的兴奋性神经元通过癫痫样高兴奋性输入回路的过度激活。研究还发现，nNOS缺失小鼠中的DGCs中cFOS阳性细胞数量显著增加，表明这些细胞的活跃性提高。此外，全细胞膜片钳记录结果显示，nNOS缺失导致DGCs兴奋性突触传递增强，表现为小型兴奋性突触电流（mEPSCs）频率显著上升，而抑制性突触传递未受影响。这些发现表明，nNOS的缺失引发了DGCs的过度兴奋，可能成为癫痫发生的重要机制之一。

使用慢病毒（LV）载体补充nNOS可以逆转匹鲁卡品诱导的TLE小鼠模型中nNOS蛋白及一氧化氮（NO）浓度的降低。更重要的是，脑电图记录显示这一补充可以阻碍慢性癫痫的发生。长期给予DETA/NONOate——一种具长半衰期的外源性NO供体，成功阻断了TLE小鼠模型中过度兴奋性输入回路的形成，显著延缓了癫痫发作。实验结果表明，NO供体治疗不仅能预防TLE的病理进展，而且未观察到对已有慢性自发癫痫发作小鼠的急性抗癫痫效果。

总的来说，这一突破性研究为颞叶癫痫的治疗提供了全新的视角。通过调节一氧化氮水平，或有望开发出更高效的治疗手段，为那些对现有药物无效的患者提供帮助。这项研究不仅是对现有治疗方法的补充，更在癫痫治疗领域带来了重大的进展。尊龙凯时人生就博在这项研究中，提供了小鼠海马组织snRNA-seq的分析支持，显示了其在生物医疗研究中的重大贡献。

作者信息：南京医科大学药学院临床药理学教研室的周其冈教授、孟帆副教授，南京医科大学附属逸夫医院神经外科的黄保胜副教授，均为本文共同通讯作者。此外，朱贤慧、周亚萍、张乔、朱明仪四位硕士研究生为本文共同第一作者。