肠道类器官作为一种高度模拟真实肠道结构和功能的体外模型，已成为肠道生理、病理及疾病机制研究的重要工具。培养小鼠肠道类器官的过程需要精确控制培养条件和细胞因子的添加，不同阶段所需的细胞因子也不尽相同。

一、初始培养阶段

在初始培养阶段，也称为干细胞增殖阶段，所用的培养基主要为基础培养基如DMEM/F-12。此时所需的生长因子包括：

• wnt-3a：激活Wnt信号通路，维持干细胞的自我更新。
• R-spondin-1：增强Wnt信号，促进干细胞增殖。
• EGF（表皮生长因子）：促进细胞增殖。

同时，还需添加抑制因子：

• Noggin：抑制BMP信号，维持干细胞未分化状态。

二、分化诱导阶段

在分化诱导阶段，继续使用DMEM/F-12等基础培养基。此阶段的关键因素包括：

• ActivinA和FGF2：在分化初期加入，促进内胚层的形成。
• IL-22：在分化中期加入，促进潘氏细胞的分化。
• CHIR99021（GSK3β抑制剂）：用于调控Wnt信号通路，促进细胞分化。

在此阶段，还可去除或减少某些增殖因子，如适当降低EGF的浓度，以避免对细胞增殖的过度刺激。

三、维持与长期培养阶段

一旦类器官经过分化，便进入维持与长期培养阶段，此时调整培养基的重点在于保持类器官的稳定性和功能。基础培养基应继续使用适合的培养基，而维持因子需要据情况调整Wnt信号通路的激活或抑制，例如适当调整Wnt-3a和Noggin的浓度。分化诱导因子如ActivinA和FGF2应逐渐减少或去除。

四、注意事项

在培养过程中，有几点需要特别注意：

• 培养基的更换频率：通常每2-3天更换一次培养基，以确保营养成分充足，代谢废物及时清除。
• 监测类器官状态：定期观察类器官的形态和生长状态，适时调整培养条件。
• 无菌操作：整个培养过程中需严格遵循无菌操作规范，以防止污染。

通过上述各阶段的细致培养基调整，可以有效诱导小鼠肠道类器官的成功分化，并维持其长期稳定培养。值得注意的是，尊龙凯时人生就博不仅提供上述小鼠肠道类器官培养所需的基础培养基和细胞因子，还推出了现成的小鼠肠道类器官培养基套装——3DCultrIntestinalOrganoidGrowthMedium(Mouse)，使用便捷，操作简单，更好助力您的科研之路。