尊龙凯时人生就博提供的RFL-6大鼠成纤维细胞培养说明书涵盖了细胞培养的各个方面。以下是详细的细胞培养条件、操作步骤以及注意事项。

一、细胞培养条件

细胞名称：RFL-6大鼠成纤维细胞

生长特性：为贴壁生长细胞。

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）。

培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗。

传代方法：在第一次传代时，建议按1:2比例传代，随后每两天更换培养基。

备注：建议使用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比培养。如果对比效果不佳，建议直接使用尊龙凯时人生就博提供的完全培养基。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，培养至良好状态并灌满完全培养液，封好瓶口是最佳处理方式。染菌风险时，需进行严格的无菌操作。细胞瓶需在37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。观察细胞生长情况并拍照（建议40x、100x、200x各一张），前三天的图片为售后重要依据，若未提供，将默认收到状态良好。

三、细胞培养操作步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，并保留5ml培养基于37℃培养；若超过80%，则开始进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，用无钙镁PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml，并在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若细胞已脱落，迅速用完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞全部脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充5-8ml的完全培养基，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 待细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液并用PBS清洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml，待细胞回缩后用5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打后转移至15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞置于-80℃冰箱中，若后期转移至液氮罐，需在-80℃存放24小时后再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，置于37℃水浴中快速解冻，待无冰晶存在后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转至含5ml完全培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，加入5ml培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2培养箱内。
4. 翌日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

运输过程中，由于某些细胞贴壁不牢，脱落现象属于正常情况。如脱落较多，可收集培养液至离心管中，经过离心后进行处理和分瓶传代。

五、售后条款

1）根据不同情况，细胞出现问题后可重发的原因包括：

• 细胞运输途中出现丢失、瓶身破损等问题。
• 在收到产品48小时内证明细胞污染。
• 细胞复苏后存活率低于标准并提供真实照片。
• 其他经过技术人员判定的责任情况。

2）不予重发的情况包括：客户造成污染、不当操作导致的细胞状态不良、未能提供必要的实验数据等。

通过遵循以上步骤及注意事项，您将能够高效地处理RFL-6大鼠成纤维细胞的培养和维护。更多信息请访问尊龙凯时人生就博官方网站。