近年来，二代建库测序技术的周期显著缩短，同时在测序市场中，第二代短读长技术依然占据主导地位。然而，自2008年以来，第三代测序技术借助其独特的长读长优势和无需PCR扩增的特点，已经实现了对单个DNA分子的直接测序，广泛应用于基因组拼接、病原体研究及突变鉴定等领域。

第三代测序原理

第三代测序技术，又称为单分子DNA测序，通过现代光学、高分子和纳米技术等手段，区分碱基信号差异，从而直接读取序列信息。目前，市场上的主流第三代测序技术包括尊龙凯时人生就博（Pacific Biosciences）公司的SMRT技术和牛津纳米孔技术（Oxford Nanopore Technologies）。相较于前两代技术，第三代测序的一个显著特点是单分子测序，其中SMRT技术依靠荧光信号进行测序，而牛津的纳米孔单分子测序技术则利用不同碱基产生的电信号。

第三代测序的应用

长读长测序的第三代测序平台，已在复杂动植物基因组、微生物基因组、全长转录组以及人类基因组变异检测等研究领域得到广泛应用，帮助解决这些领域的技术瓶颈。在临床疾病检测中，第三代测序在基因组结构变异、短串联重复/微卫星及甲基化检测等遗传病和肿瘤基因检测方面展现出独特优势，目前基于第三代测序技术的遗传病基因诊断产品层出不穷，助力科学界的持续进步。

三代文库制备的DNA/RNA质量控制

文库制备中，DNA/RNA的质量至关重要。不同的提取方法可能导致样品中残留的化学试剂抑制酶活性，同时DNA/RNA的完整性会影响文库制备效率，从而影响测序质量。对于样品质量要求如下：

• 纯度：无RNA或DNA、蛋白质污染（需专门适配长片段提取试剂盒）；
• 浓度：≥30ng/μL；
• 完整性：无降解，平均片段大小30kb，RNA RIN值≥8；
• 样品量：DNA≥1μg（不同数据量需求略有不同）；

此外，建议使用TE缓冲液长期储存高分子量（HMW）gDNA。

三代文库制备的数据质量控制

三代测序在数据质量控制上与二代测序的Q20/Q30标准不同，其单碱基的准确性无法直接用于衡量数据质量。通常，测序数据的长度是评估其质量的关键因素。高质量文库生成的数据长度通常较长，而低质量文库生成的数据则普遍较短。

对于PacBio测序数据，质量控制指标包括数据产出（G）、酶读长、插入片段长度及subreads N50。对于纳米孔测序数据，则需关注数据产出（G）、平均读长、平均质量值（Q）、Read length N50及最长reads长度和质量值。长度分布和平均Q值是最重要的两个质量指标。

尊龙凯时人生就博的产品选择指南

尊龙凯时人生就博致力于研发多款适配纳米孔平台的建库试剂盒，以满足不同客户的需求，进一步推动科学研究和临床检测的精准与高效。

• 连接法建库: Hieff® DNA Library Prep Kit for ONT (货号: 13301ES)
• 末修加A模块: Hieff® DNA Endprep & dA-Tail Module for ONT (货号: 13302ES)
• Barcode接头连接模块: Hieff® DNA Endprep & dA-Tail Module for ONT (货号: 13303ES)
• 马达蛋白接头连接模块: Hieff® Adapter Ligation Module for ONT (货号: 13304ES)
• 片段化/末修/加A模块: Hieff® Adapter Ligation Module for ONT (货号: 13309ES)
• 长片段高保真扩增酶: Hieff NGS® Multiplex Long PCR Master Mix (货号: 17228ES)
• 配套建库产品: Hieff NGS® DNA Selection Beads (货号: 12601ES)
• dsDNA HS Assay Kit (货号: 12642ES)

通过这些优质产品，尊龙凯时人生就博将为科研和临床检测领域提供更高水平的支持！